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摘要
目的探讨不同年龄及生长因子对大鼠内耳前体细胞体外增殖的影响。方法 1分离取出出生后1天(P1)、7天(P7)、14天(P14)、21天(P21)、30天(P30)、60天(P60)各天龄12只(24耳)SD大鼠的球囊斑、椭圆囊斑、Corti器的前体细胞,在无血清条件下进行单细胞悬浮培养,至第七天,在倒置相差显微镜下对所形成的细胞球进行计数;2取P1大鼠球囊斑、椭圆囊斑、Corti器高增殖细胞分为实验组和对照组,实验组分为四组,培养液分别添加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),对照组不加生长因子,观察不同生长因子对细胞球数量的影响;3免疫荧光染色检测细胞球的表型特征。结果1P1SD大鼠内耳各器官单细胞表现为nestin阳性,培养7天后,可形成悬浮的细胞球,球体细胞免疫荧光表现为nestin和BrdU阳性;2耳蜗Corti器只在P1、P7可形成细胞球,而球囊斑、椭圆囊斑各天龄段均可形成细胞球;3培养液中添加EGF、bFGF、IGF-1组,培养形成的细胞球数量明显增多,与对照组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01);添加LIF组则与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠内耳球囊斑、椭圆囊斑以及耳蜗Corti器内有高增殖能力细胞,能表达神经干细胞的特性;随着鼠龄的增长,这种增殖能力总体表现为减退趋势;EGF、bFGF、IGF-1均可单独促进P1大鼠内耳前体细胞的增殖,而LIF无促增殖作用。
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