miR-29b激活自噬抑制人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

作者：刘静; 雷春灵; 白淑玮; 张磊; 陈莉^*

来源：眼科新进展, 2019, 39(09): 805-808.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2019.0183

• miR-29b
• LC3
• 自噬
• 视网膜色素上皮细胞
• 增殖

目的研究miR-29b激活自噬抑制人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增殖的作用。方法通过病毒颗粒包装转染RPE细胞24～72 h,在倒置荧光显微镜下观察荧光强度检测感染效率,利用实时定量PCR检测miR-29b mRNA表达。采用凝血酶刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型。使用0.5×103 U·L-1凝血酶预刺激1 h,然后分别加入miR-29b和Lenti-vector空载体刺激24 h。分为空白对照组(Sham组)、凝血酶刺激组(RPE组)、凝血酶刺激组+miR-29b过表达组(RPE+Lenti-29b组)、凝血酶刺激组+空载体组(RPE+Lenti-vector组)。利用MTT微量酶比色法检测各组RPE细胞增殖情况,Western blot观察微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)Ⅱ表达变化。结果在倒置荧光显微镜下观察发现,RPE+Lenti-29b组和RPE+Lenti-vector组90%以上的RPE细胞成功转染,且RPE+Lenti-29b组miR-29 mRNA水平高表达,与其余3组相比差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与Sham组比较,其余3组RPE细胞增殖明显,差异均有统计学意义(均为P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达也明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与RPE+Lenti-29b组比较,RPE组和RPE+Lenti-vector组细胞增殖明显(均为P<0.05),但LC3Ⅱ蛋白表达明显低于RPE+Lenti-29b组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论上调miR-29b表达可激活RPE细胞中LC3Ⅱ蛋白表达,提高细胞自噬水平,抑制RPE细胞增殖,可能在增生性玻璃体视网膜病变发生及发展中扮演重要作用。

• 单位
  北京市健宫医院; 西安市第四医院; 中国人民解放军空军军医大学; 西京医院; 西安交通大学