新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

作者：华炯钢; 叶伟成; 倪征; 陈柳; 朱寅初; 云涛^*; 张存^*

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(12): 2396-2406.

• 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)
• σC蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)是近年来发现的一种新病原,可引起各品种鸭及鹅发病,给我国养鸭业造成巨大的经济损失。NDRVσC蛋白是主要的外衣壳蛋白之一,通过细胞受体介导使病毒吸附于宿主细胞,并诱导宿主机体产生型特异性抗体。为制备NDRVσC蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达和纯化的重组σC蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组纯化的σC蛋白为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出4株稳定分泌NDRVσC蛋白的McAbs杂交瘤细胞株A5-A1、A5-B6、A9-D4和B9-6。Western blot结果显示,4株McAbs均能识别NDRV全病毒和原核表达的重组σC蛋白;间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,4株McAbs均与NDRV呈阳性反应,与经典鸭呼肠孤病毒(Classical duck reovirus,CDRV)和禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)呈阴性反应。利用人工合成相互重叠的多肽库和一系列截短多肽,对4株McAbs识别的抗原表位进行鉴定,结果表明,3株单抗A5-A1、A5-B6和B9-6识别的核心抗原表位均为177PILSGPADA185,A9-D4单抗识别的抗原表位可能呈空间构象。抗原表位的保守性分析表明,该抗原表位在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株中具有很高的保守性。上述结果表明,177PILSGPADA185是NDRV的型特异性B细胞线性表位。本研究为深入探讨σC蛋白结构和建立NDRV临床检测方法提供基础资料。

• 单位
  浙江省农业科学院