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摘要
为制备恙虫病东方体SJ2株基因重组抗原和恙虫病血清学诊断备选抗原,根据恙虫病东方体56kDa外膜蛋白基因序列设计特异性引物,经PCR扩增东方体SJ2株56 kDa型蛋白羧基端部分基因,序列测定并用软件Bioedit与我国主要东方体流行株56kDa蛋白进行氨基酸序列比对分析。然后克隆至载体pET-28a并在BL21菌体中诱导表达,通过His镍柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定分析。结果显示,成功扩增出恙虫病东方体SJ2株56 kDa蛋白708 bp基因片段,氨基酸序列比对显示,该截短蛋白含2个保守区和1个可变区。经IPTG诱导表达后,蛋白电泳在27 kDa处出现明显目标条带。Western-blot结果显示,该蛋白与恙虫病病人血清有特异性免疫反应,与正常人血清不反应。结果表明,诱导表达的重组56 kDa蛋白具有良好的免疫原性,可能备选为恙虫病诊断抗原用于恙虫病血清学检测。
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