H9N2亚型禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

作者：李龙飞; 黄傲雪; 袁佳欣; 巨鹏昊; 李乐梅; 王美欢; 闫茗硕; 徐彤^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(11): 1377-1383.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0182

• H9N2亚型禽流感病毒
• HA1蛋白
• 原核表达
• 间接ELISA

为建立H9N2亚型禽流感病毒（AIV）抗体快速、高效的血清学检测方法，参考GenBank数据库中H9N2 AIV的HA基因序列（登录号：MK995886.1）设计并合成特异性引物，以H9N2 AIV RNA为模板，RT-PCR扩增目的基因HA1，构建pET28a-HA1重组质粒，经原核系统表达获得HA1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白表达和反应原性，用纯化后的HA1重组蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示，该检测方法抗原最佳包被浓度为0.2μg/mL，血清最佳稀释度为1∶160，用1%BSA溶液37℃封闭60 min效果最佳，酶标二抗最佳稀释度为1∶6 000，具有较高的特异性、灵敏性和符合率。上述结果表明，本试验成功表达并纯化了H9N2 AIV的HA1蛋白，建立的间接ELISA检测方法为H9N2 AIV的流行病学调查、免疫效果评价及临床诊断试剂盒的开发奠定了基础。

• 单位
  河北北方学院; 动物科技学院