MafA真核表达载体的构建及在人肝癌细胞中的表达

作者：黄栋; 任伟; 张素华; 邵伟

来源：重庆医科大学学报, 2009, 34(08): 988-991.

• pEGFP-N2
• pEGFP-C1
• 肌腱膜纤维肉瘤肿瘤基因同系物A

目的:构建肌腱膜纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(MafA)真核表达载体pEGFP-N2/MafA,pEGFP-C1/MafA,观察MafA在人肝癌细胞HepG-2细胞内的表达。为研究Mafa基因功能和作用机制奠定基础。方法:提取胰腺总RNA,经RT-PCR获得MafA基因片段,在两端分别引入Hind Ⅲ和Sal Ⅰ的酶切位点,重组至有增强绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N2,pEGFP-C1中,用脂质体方法转染至人肝癌细胞HepG-2细胞中,通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,通过RT-PCR检测MafA基因和insulin Ⅱ基因的表达。结果:通过RT-PCR获取了MafA基因并成功克隆入载体,转染的细胞有绿色荧光蛋白表达及MafA基因表达,但没检测到insulin Ⅱ基因表达。结论:成功构建质粒pEGFP-N2/MafA和pEGFP-C1/MafA,并成功表达MafA基因,但没有insulin Ⅱ基因的表达。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院