KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学

作者：刘雄; 张凤娇; 李享; 陈芳红; 房华丽; 王琴; 李涛; 王慧

来源：生物技术通讯, 2013, (05): 650-654.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2013.05.012

• 细菌耐药
• KPC-2型碳青霉烯酶
• β内酰胺类抗生素
• 酶催化动力学 antibiotic resistance
• Klebsiella pneumoniaecarbapenemase-2
• β-lactamase
• enzyme kinetics

目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院