弓形虫SRS29C基因敲除株的构建与鉴定

作者：姜阜杉; 叶建军; 田静; 高传亮; 王宇冰; 艾晴晴; 魏瑶; 宋淇淇^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(02): 329-334.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.02.17

• 弓形虫
• SRS29C
• CRISPR/Cas9
• 基因敲除

为了探究刚地弓形虫SRS29C基因的生物学特性，利用大肠杆菌原核表达系统将SRS29C基因进行体外表达并制备多克隆抗体。同时利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫SRS29C基因敲除虫株，通过乙胺嘧啶筛选及PCR单克隆筛选，并进行Western blot试验进一步验证SRS29C单克隆敲除株。结果显示，SRS29C蛋白在体外成功表达，且制备的多克隆抗体免疫原性良好。SRS29C基因敲除株在加入乙胺嘧啶后能够正常生长，经PCR鉴定能扩增出797 bp的5′UTR(SRS29C)片段及576 bp的3′UTR(SRS29C)片段，且未扩增出SRS29C基因片段，而在对照组中扩增出了700 bp的SRS29C片段，同时蛋白验证基因敲除株中未能表达SRS29C蛋白。结果表明，成功构建并筛选出SRS29C基因敲除单克隆虫株，暂时命名为ME49△SRS29C及RH△SRS29C,为弓形虫SRS29C基因功能的研究奠定了基础。

• 单位
  天津农学院