LC-MS/MS法测定药用植物基因组DNA甲基化水平

作者：黄琼林; 文娟; 李兆锦; 蔡春

来源：中国药房, 2016, 27(16): 2210-2213.

• DNA甲基化
• 液相色谱-质谱联用法
• 胞嘧啶
• 5-甲基胞嘧啶
• 药用植物

目的:建立测定药用植物基因组DNA甲基化水平的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。方法:采用试剂盒提取药用植物基因组DNA,并用88%甲酸在140℃下裂解DNA,经氮气吹干后,用流动相重新溶解。采用HILIC亲水作用色谱柱,以7 mmol/L甲酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 ml/min。采用电喷雾离子源正离子模式进行监测,多反应监测(MRM)模式下进行定量分析,计算10种常见药用植物基因组的DNA甲基化率。结果:Cyt、5m C检测质量浓度线性范围分别为1500(r=0.999 5)、0.2100 ng/ml(r=0.999 6),精密度试验的RSD分别为1.12%和3.68%(n=6),日内稳定性试验的RSD分别为2.36%和4.02%(n=5),日间稳定性试验的RSD分别为1.04%和3.54%(n=3),重复性试验的RSD分别为1.53%和3.27%(n=6),方法回收率分别为98.7%102.1%、91.2%103.5%。10种药用植物基因组的DNA甲基化率在17.63%25.18%之间。结论:LC-MS/MS法简便、快速、灵敏度高、精密度好,可用于药用植物基因组DNA甲基化水平的检测。

• 单位
  广东医科大学