氧合酶家族分子在叶酸缺乏中对人神经母细胞瘤细胞、淀粉样前体蛋白和β位淀粉样前体裂解酶-1表达的影响

作者：雷艺; 丁斌荣; 唐旻; 涂秋云^*

来源：中华老年医学杂志, 2018, 37(03): 324-329.

• 叶酸
• DNA甲基转移酶
• 氧合酶
• 淀粉样蛋白
• β位淀粉样前体裂解酶

目的探讨氧合酶家族分子(TET)在叶酸缺乏条件下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR-32细胞的增殖能力及淀粉样前体蛋白(APP)基因、早老素1(PS1)基因以及β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)基因表达的影响及机制。方法体外培养SH-SY5Y、IMR-32细胞, 分为叶酸缺乏组、低剂量组、正常对照组, 采用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖、实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中APP、PS1、BACE1、TETs、甲基转移酶(DNMTs)基因mRNA的表达;构建TET1低表达稳转细胞株, 采用荧光倒置显微镜观察荧光蛋白, MTT法观察细胞增殖, RT-PCR检测细胞中TET1、APP、PS1、BACE1的转录水平。结果 (1)在叶酸缺乏组及低剂量组, 培养120 h和144 h后SH-SY5Y、IMR-32细胞增殖能力明显降低(均P<0.001);SH-SY5Y细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=80.315、35.386、101.979、786.407、80.331、131.545、28.000、9.165、102.167, 均P<0.05), IMR-32细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=12.283、93.669、40.815、157.234、24.835、147.594、54.794、73.068, 均P<0.05)。(2)构建TET1低表达稳转细胞株, 低表达组(SH-SY5Y-shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.25±0.02, 低于阴性对照组1.00±0.09(P=0.007);低表达组(IMR-32-shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.28±0.07, 低于阴性对照组1.00±0.01(P=0.003)。(3)相较于阴性对照组, 低表达组(SH-SY5Y-shTET1、IMR-32-shTET1)的增殖能力均增加(均P<0.01);且细胞内APP、BACE1的mRNA水平降低(P<0.01或P<0.05)。结论在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR-32中, 叶酸缺乏上调TETs的表达, 通过TET蛋白去甲基化途径增加细胞中APP、BACE1表达, 并抑制细胞生长。

• 单位
  中南大学湘雅三医院