芦丁对肝细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

作者：金芳多; 张天; 张钊; 尹学哲; 全吉淑^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2020, 46(06): 1117-1345.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20200602

• 芦丁
• 叔丁基过氧化氢
• 氧化应激
• 肝细胞损伤
• 肝细胞保护

目的:探讨芦丁对肝癌HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:培养人肝癌HepG2细胞,取处于对数生长期的HepG2细胞分为对照组、叔丁基过氧化氢(TBHP)组(给予400μmol·L-1TBHP)和0.25、 0.50、 1.00μmol L-1芦丁组(给予0.25、 0.50和1.00μmol·L-1芦丁+400μmol·L-1TBHP)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组HepG2细胞活性和各组肝癌HepG2细胞存活率,比色法检测各组肝癌HepG2细胞中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用二氯荧光素乙酰乙酸盐(DCFH-DA)荧光染色法检测各组肝癌HepG2细胞中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组肝癌HepG2细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化AktB (p-Akt)、核转录因子κB (NF-κB)、磷酸化NF-κB (p-NF-κB)和p53蛋白表达水平。结果:MTT检测,芦丁摩尔浓度≤1μmol·L-1时,肝癌HepG2细胞的存活率均>90%,不显示细胞毒性;当芦丁摩尔浓度>1μmol·L-1时,肝癌HepG2细胞存活率逐渐降低,均<90%,显示细胞毒性。与对照组比较,TBHP组HepG2细胞存活率明显降低(P<0.01);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组HepG2细胞存活率明显升高(P<0.01)。比色法检测,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中MDA水平明显升高(P<0.01),GSH水平和SOD活性明显降低(P<0.01);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中MDA水平明显降低(P<0.01),GSH水平和SOD活性明显升高(P<0.01)。DCFH-DA染色,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中ROS水平明显升高;与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中ROS水平降低。Western blotting法检测,与对照组比较,TBHP组肝癌HepG2细胞中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05),NF-κB、p-NF-κB和p53蛋白表达水平升高(P<0.05);与TBHP组比较,不同浓度芦丁组肝癌HepG2细胞中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平升高(P<0.05),NF-κB、p-NF-κB和p53蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:芦丁对肝癌HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调控PI3K/Akt和NF-κB两条信号通路有关联。

• 单位
  基础医学院; 延边大学