摘要

本文对仿刺参具有高降血压活性部位进行筛选并优化其活性肽制备工艺。采用酶解法对仿刺参不同部位(体壁、肠、卵)进行水解,以血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为指标筛选最适蛋白酶,通过对各酶解物ACE抑制率的半数抑制浓度(IC50)测定比较筛选出最优抑制活性部位。经单因素与响应面试验优化确定活性肽最佳酶解制备条件,对蛋白酶解物进行相对分子质量测定确定其分布范围,经超滤膜分离后对不同组分的ACE抑制活性分析。结果显示,选用碱性蛋白酶为最适水解酶,体壁、肠、卵各蛋白酶解物的ACE抑制率的IC50分别为1.11 mg/mL、4.02 mg/mL、0.65 mg/mL,仿刺参卵具有更好的ACE抑制效果,为最优抑制活性部位。其最佳的酶解制备工艺参数为:酶解时间5 h,加酶量3.5 U/mg,酶解温度65.26 ℃,底物浓度3.51%,酶解pH 9.02,在该条件下仿刺参卵的ACE抑制率为80.65%±0.52%,与预测值接近。蛋白酶解产物的相对分子质量集中分布在3 kDa以下,占总含量的98.37%,其中1 kDa~3 kDa占比9.50%,小于1 kDa占比88.87%。超滤膜分离所得低聚肽组分ACE抑制活性(IC50=0.30 mg/mL)显著强于经工艺优化后酶解物及截留液组分。本研究结果为仿刺参副产物高值化利用提供理论依据,可作为分离纯化制备降血压肽的优质资源。

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