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摘要
目的长链非编码RNA肿瘤易感性候选基因9(long non-coding RNA tumor susceptibility candidate gene 9,lncRNACASC9)有助于肿瘤的发生和发展,但它是否影响着肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞的干性特征罕见报道。本研究旨在探讨LncRNA CASC9对HCC细胞干性特征的影响及作用机制。方法培养人HCC细胞系SNU-475、HepG2、SNU-398、Huh-7和人永生化肝上皮细胞L02,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测各细胞中LncRNA CASC9表达水平。将Huh-7细胞分为空白对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)和CASC9 siRNA干扰组(siRNA-CASC9),并将CASC9 siRNA干扰质粒及其阴性对照质粒转染至Huh-7细胞中,采用qRT-PCR检测转染后细胞中lncRNACASC9表达水平及干性相关基因OCT-4、SOX2、Bmi1和Nanog等mRNA水平;克隆形成实验和细胞成球实验检测转染后细胞的干性细胞特征,流式细胞仪检测干细胞(EpCAM+AFP+)亚群的比例,蛋白质印迹法检测转染后细胞中OCT-4、SOX2、Bmi1、Nanog、p-STAT3、STAT3、KLF4和c-Myc等蛋白表达水平。结果 L02、SNU-475、HepG2、SNU-398和Huh-7细胞系培养48h后,细胞中lncRNACASC9表达量分别为1.03±0.07、2.06±0.19、1.77±0.20、2.88±0.14和3.63±0.37,差异有统计学意义,F=64.115,P<0.001。其中SNU-475(P<0.001)、HepG2(P=0.002)、SNU-398(P<0.001)和Huh-7(P<0.001)细胞中LncRNACASC9表达量均低于L02细胞。CASC9干扰48h后,siRNA-CASC9组细胞中lncRNA CASC9表达量为0.41±0.05,低于Control组(1.03±0.07)和siRNA-NC组(1.01±0.03),F=144.970,P<0.001;siRNA-CASC9组细胞克隆形成数为(45.00±10.81)个,低于Control组(277.33±7.77)个和siRNA-NC组(264.67±9.71)个,F=565.358,P<0.001;siRNA-CASC9组细胞成球率为(12.74±2.56)%,低于Control组的(25.93±3.89)%和siRNA-NC组的(24.61±4.72)%,F=10.810,P=0.010;siRNA-CASC9组EpCAM+AFP+细胞亚群比例为(4.68±0.33)%,低于Control组的(8.64±0.84)%和siRNA-NC组的(7.91±1.08)%,F=20.289,P=0.002;siRNA-CASC9组细胞中OCT-4、Nanog、SOX2和Bmi1等mRNA和蛋白相对表达水平分别低于Control组和siRNA-NC组,差异有统计学意义,P<0.05;siRNA-CASC9组细胞中p-STAT3/STAT3、KLF4和c-Myc等蛋白相对表达水平均低于Control组和siRNA-NC组,F值分别为13.525、25.122和35.038,均P<0.05。结论 LncRNACASC9在HCC细胞系中的表达水平高于正常肝细胞,干扰lncRNACASC9表达能降低HCC细胞的干性特征,其机制可能与STAT 3信号通路的抑制有关。
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