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摘要
背景微小RNA-107(miRNA-107)在多种肿瘤(如膀胱癌、乳腺癌)的发生发展过程中具有重要作用,但其在过敏性哮喘发生发展中的作用尚不完全清楚。目的探讨mi RNA-107对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和迁移的影响。方法本研究时间为2019年9月—2020年12月。原代培养SPF级雌性BABL/c小鼠的ASMCs,运用免疫荧光鉴定ASMCs。将细胞随机分为mi RNA-107模拟物组(mi RNA-107 mimic组)、模拟物对照组(mimic NC组)和mi RNA-107抑制剂组(mi RNA-107 inhibitor组)、抑制剂对照组(inhibitor NC组)。mi RNA-107 mimic组和mimic NC组的细胞分别转染5μl 20μmol/L的mi RNA-107 mimic或5μl 20μmol/L的mimic NC+7.5μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基;mi RNA-107 inhibitor组和inhibitor NC组的细胞分别转染10μl 20μmol/L的mi RNA-107 inhibitor或10μl 20μmol/L的inhibitor NC+15μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基。采用荧光定量试剂盒检测各组ASMCs中mi RNA-107相对表达水平,Brd U细胞增殖检测试剂盒(比色分析法)检测各组细胞增殖能力(吸光度差值),穿梭小室检测各组细胞迁移能力(迁移细胞数)。分别比较mi RNA-107 mimic组与mimic NC组、mi RNA-107 inhibitor组与inhibitor NC组ASMCs中mi RNA-107相对表达水平、细胞增殖能力和细胞迁移能力。结果ASMCs从组织块周围呈放射状萌出,7 d后逐渐长满培养瓶,呈谷峰状;首次传代后,ASMCs呈梭形,多有突起,生长致密且平行排列;培养2代后的ASMCs经免疫荧光鉴定后有绿色荧光;经鉴定,99%以上的细胞均是ASMCs。mi RNA-107 mimic组ASMCs中mi RNA-107相对表达水平高于mimic NC组,吸光度差值、迁移细胞数低于mimic NC组(P <0.05)。mi RNA-107 inhibitor组ASMCs中mi RNA-107相对表达水平低于inhibitor NC组,吸光度差值、迁移细胞数高于inhibitor NC组(P <0.05)。结论 mi RNA-107可以抑制ASMCs的增殖和迁移。抑制mi RNA-107的表达可以促进ASMCs的增殖和迁移,这可能是哮喘患者发生气道重塑的机制之一。因此,mi RNA-107有望作为抑制气道重塑的一个靶点,为哮喘的治疗提供新的方法。
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单位广东省深圳市人民医院; 深圳北京大学香港科技大学医学中心
