ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

作者：赵硕; **伟; 肖婷; 何颖; 张宁; 覃国喜; 卢冰霞; 段振华; 秦毅斌; 张胜斌; 段群棚; 赵武^*; 韦明宇^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(06): 671-678.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0117

• 非洲猪瘟病毒
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 多重TaqMan荧光定量PCR

为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法，本研究选择猪源β-actin为内参基因，根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针，通过优化反应条件，建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证，并初步应用于临床样品的检测。结果显示，该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增；对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×101 copies/μL、1.19×102 copies/μL和5.99×103copies/μL，同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%；用该方法检测92份临床样品，未检出ASFV，检出19份PRRSV阳性样品。结果表明，本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法，较普通PCR敏感性高103倍，可应用于ASFV和PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查。

• 单位
  华中农业大学; 广西壮族自治区兽医研究所; 农业微生物学国家重点实验室; 广西农垦永新畜牧集团有限公司; 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司; 玉林市动物疫病预防控制中心; 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司