人胰岛素样生长因子-Ⅰ转染脂肪间质干细胞向软骨细胞分化

作者：安春厚; 原泉; 李建军

来源：中华创伤杂志, 2009, 25(2): 169-172.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-8050.2009.02.51

• 胰岛素样生长因子Ⅰ
• 间质干细胞
• 转染
• 细胞周期
• 软骨细胞

目的 探讨人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ)转染脂肪间质干细胞(ADSCs)的效果及表达情况,探寻转染后ADSCs向软骨细胞分化的可能性. 方法 从兔颈后脂肪分离培养ADSCs,检测其生长特性.用Lipofectamine 2000介导将质粒pcDNA3.1+hlGF-Ⅰ转染ADSCs,转染后4～72 h、传代后和稳定转染后,分别用倒置显微镜观察细胞的生长情况,计算转染效率.ELISA检测上清液中hlGF-Ⅰ的浓度变化.免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达.RT-PCR检测hIGF-Ⅰ mRNA和Western blot检测hIGF-Ⅰ蛋白表达情况.流式细胞仪检测细胞周期分布情况.结果细胞接种后4 h开始贴壁,呈长梭形,24 h时增多,呈集簇状分布.转染后增生活跃,倍增时间缩短.转染72 h后分泌hIGF-Ⅰ达高峰,为32.45 ng/ml,稳定转染后hIGF-Ⅰ保持恒定为28.36 ng/ml.转染后细胞出现多种形态共存.免疫组化证实有大量Ⅱ型胶原形成.hIGF-ⅠmRNA和hIGF-Ⅰ蛋白呈阳性表达.细胞周期中s期增加,与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论稳定转染后ADSCs可较长时间分泌较高浓度的hIGF-Ⅰ,能促进ADSCs的增殖、分化,并可形成软骨样物质.

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院