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摘要
病毒病是苹果栽培亟待解决的问题,不仅严重损坏苹果品质,还给树体带来毁灭性灾害。超低温脱毒技术的诞生和发展对果树脱毒苗的培育产生了重要影响。本试验研究出新型茎尖超低温脱毒技术体系并成功脱除苹果病毒ACLSV和ApMV。试验选取‘烟富3号’、‘烟富10号’、‘M9’、‘M9T337’四种苹果及砧木材料,提取总RNA进行RT-PCR病毒检测,发现‘烟富3号’携带ACLSV和ApMV,苹果砧木‘M9’和‘M9T337’携带ACLSV。对携带病毒材料进行初代、继代扩繁培养,然后取2 mm茎尖进行超低温处理,并用多重RT-PCR检测再生植株,获取脱毒苗后进行生根培养与炼苗移栽。结果表明,最佳玻璃化超低温处理为:预培养采用0.5 mol/L蔗糖浓度处理2 d,25℃下装载60 min,0℃下PVS2溶液处理90 min,液氮冷冻1 h,40℃水浴2 min解冻,苹果茎尖的存活率为78.33%,脱毒率可达95.74%。玻璃化超低温处理是产生脱毒效果的直接原因,运用超低温处理可以有效脱除苹果病毒ACLSV和ApMV。
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