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摘要
目的:建立一种基于CFTR可敏感检测胞浆内第二信使cAMP的检测方法。方法:构建CFTR和YFP-H148Q/I152L真核表达载体，应用脂质体转染法构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞，倒置荧光显微镜观察其表达情况，流式细胞仪检测细胞纯度；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性；荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CFTR调节剂；放射免疫法检测加入CFTR激活剂后细胞内的cAMP浓度。结果:倒置荧光显微镜下观察到CFTR表达在细胞膜上，YFP-H148Q/I152L表达于胞浆中；成功构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型；荧光变化斜率值与CFTR调节剂浓度成剂量依赖关系，该模型可筛选CFTR调节剂；荧光变化斜率值可反映胞浆内cAMP浓度，该模型可敏感检测胞浆内cAMP浓度。结论:此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使cAMP浓度，为cAMP信号相关靶点的研究提供一种简便快捷的方法。
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