腺病毒介导PKM2 RNAi对MCF7细胞影响的研究

作者：王润秀; 侯志平; 谢富华

来源：中华肿瘤防治杂志, 2016, 23(05): 283-287.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2016.05.003

• 重组腺病毒
• PKM2
• RNAi
• MCF7

目的丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)是糖酵解的关键酶之一,其M2型同工酶(PKM2)高表达于乳腺癌等肿瘤中。本研究探讨PKM2RNAi对乳腺癌细胞MCF7系增殖、ATP产生、侵袭和细胞粘附能力的影响及其可能机制。方法通过介导PKM2shRNA构建重组腺病毒Ad-PKM2,用以感染人乳腺癌细胞系MCF7。病毒感染细胞24和48h后,收集细胞总蛋白行免疫印迹实验检测基因沉默的效果,CCK-8实验检测细胞增殖和粘附能力,Transwell实验检测细胞穿透人工基底膜能力,采用JC-1探针观察细胞线粒体活性并用试剂盒检测细胞ATP含量。结果免疫印迹结果表明,腺病毒成功介导MCF7细胞发生PKM2RNAi。病毒感染后细胞的增殖能力被抑制41.0%,P<0.05。穿过人工基底膜的细胞减少50.2%;细胞的粘附能力下降34.7%,P<0.05;细胞内的ATP含量从正常的90μmol/L下降至68.3μmol/L(P<0.05),而细胞线粒体活性并未受明显影响。结论在乳腺癌MCF7细胞中,抑制PKM2蛋白的表达可有效抑制细胞的增殖、侵袭和粘附能力,其机制可能是减少了细胞的ATP能量供应。

• 单位
  赣南医学院第一附属医院; 赣南医学院