产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建

作者：徐悦; 周明旭; 朱纯; 尹文竹; 马芳; 鲍熹; 张金秋; 卢宇^*

来源：江苏农业科学, 2020, 48(17): 54-58.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2020.17.009

• 大肠杆菌
• MPLA
• Red同源重组
• 佐剂
• 疫苗
• 细菌脂多糖

细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因,缺失大肠杆菌lpxM基因。结果显示,J5ΔlacI::lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低;对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物,重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常。同时,腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大,发生炎性浸润,有明显的毒性反应。以上结果说明,J5重组菌的LPS已经区别于原菌,是低毒性的MPLA产物。上述重组株的成功构建,能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础。

• 单位
  江苏省农业科学院; 江苏大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心