温补肾阳方通过ROS/p38 MAPK通路对骨髓增生异常综合征细胞株自噬及凋亡的影响

作者：赵志芳; 赵志英; 杨艳敏; 席亚男; 刘泉^*

来源：山西医科大学学报, 2021, 52(04): 463-468.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2021.04.012

• 骨髓增生异常综合征
• 温阳补肾方
• 细胞凋亡
• 细胞自噬
• 活性氧/P38丝裂原活化蛋白激酶通路

目的探讨温阳补肾方对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1凋亡和自噬的影响及其机制。方法 SD大鼠分别以5,10,20 g/kg温阳补肾方药液和等量生理盐水灌胃,获得低、中、高剂量温阳补肾方含药血清及对照血清;将体外培养的SKM-1细胞分为空白对照组、生理盐水组和药物低、中、高剂量组(分别加入低、中、高剂量温阳补肾方含药血清),采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测SKM-1细胞增殖和凋亡,比色法检测SKM-1细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测SKM-1细胞内活性氧(ROS)水平,免疫印迹法(Western blot)检测SKM-1细胞中自噬相关蛋白Beclin1、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路相关蛋白P38 MAPK、p-P38 MAPK表达水平。结果与空白对照组相比,生理盐水组细胞增殖活力、凋亡率、Caspase-3活性、ROS水平以及P62、Beclin1蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-P38 MAPK/P38 MAPK比值差异无统计学意义(P>0.05)。与生理盐水组比较,药物低、中、高剂量组SKM-1细胞增殖活力和P62蛋白表达水平明显降低,而细胞凋亡率、Caspase-3活性、ROS水平、Beclin1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和p-P38 MAPK/P38 MAPK值均明显升高(P <0.05),且呈一定的药物浓度依赖性(P <0.05)。结论温阳补肾方可能通过激活ROS/p38 MAPK信号通路,调控细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达,进而促进MDS细胞发生凋亡自噬。

• 单位
  苏州高新区人民医院; 邢台市人民医院; 北京王府中西医结合医院; 邢台医学高等专科学校第一附属医院