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摘要
目的 研究RNA N6-腺苷酸甲基化（N6-methyladenosine, m6A）识别蛋白YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2(YTHDF2)与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）甲基化胶质瘤化学治疗（简称化疗）抵抗的关联，并探索其潜在机制。方法 共纳入中国脑胶质瘤基因图谱计划（CGGA）数据库中的325例胶质瘤患者，收集其一般及临床信息（包括患者的组织学病理和分子病理信息、总生存期、术后辅助性治疗信息和包含YTHDF2在内的基因表达谱信息）。利用Kaplan-Meier生存曲线和Logrank检验评价YTHDF2表达水平与替莫唑胺（TMZ）治疗敏感性及生存预后的关系。通过慢病毒感染体外构建YTHDF2稳定敲低的胶质瘤细胞模型，利用细胞活性检测试剂盒8(CCK-8试剂盒)检测不同YTHDF2表达水平细胞在TMZ处理后的存活率。通过基因集合富集分析（GSEA））和基因本体（GO）功能注释，分析YTHDF2表达升高参与TMZ治疗抵抗的潜在机制。结果 临床数据库队列分析发现，m6A识别蛋白YTHDF2表达水平高的胶质母细胞瘤化疗治疗后总生存期显著短于YTHDF2表达水平低者（P<0.01）。经800、1 500、2 000μmol/L的TMZ处理48 h后，与对照shRNA比较，YTHDF2 shRNA1(800μmol/L的TMZ除外)和YTHDF2 shRNA2的细胞相对存活比例均明显降低，差异均具有统计学意义（均P<0.01）。生存分析结果表明，在MGMT甲基化组中，YTHDF2低表达水平患者的总体生存率明显高于YTHDF2高表达水平患者（P<0.05）；在MGMT非甲基化组中，YTHDF2低高表达水平患者的总体生存率差异无统计学意义（P>0.05）。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路注释结果显示，表达升高的基因主要富集在与细胞因子介导的细胞间相互作用、细胞周期以及Janus激酶-信号转导和转录激活因子信号通路，而表达降低的基因主要富集在正常神经活动相关的信号通路。GSEA分析结果显示，YTHDF2高表达的胶质母细胞瘤基因富集与上皮间质转化、细胞分裂活动和核因子κB介导的肿瘤坏死因子α等特征密切相关。GO功能注释结果显示，在YTHDF2高表达组中，高表达的基因功能主要聚集在细胞周期和细胞因子相关的生物学过程中。结论 RNA甲基化识别蛋白YTHDF2表达可用作预测和评估MGMT甲基化的胶质瘤化疗敏感性的分子指标。
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