活膝汤对膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞焦亡的作用机制

作者:谢芳; 刘永利; 李树冬; 戴斌玉; 刘涛; 陈绍军*; 邵先舫*
来源:湖南中医药大学学报, 2023, 43(02): 225-231.
DOI:10.3969/j.issn.1674-070X.2023.02.008

摘要

目的 观察活膝汤对膝骨关节炎模型大鼠膝关节软骨组织形态结构及趋化因子配体2 (CC chemokine ligand 2,CCL2)、趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2, CCR2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、磷酸化p65(phosphorylated p65, p-p65)表达水平的影响。方法 32只SPF级大鼠随机分为正常组(9只)与造模组(23只)。造模组采用改良Hulth造模法制备大鼠膝骨关节炎模型。造模后各组随机分别取2只大鼠验证造模效果。造模组剩余的21只大鼠随机分成3组:模型组、活膝汤组(12.81 m L·kg-1·d-1)、阳性药物组(20 mg·kg-1·d-1),每组7只。正常组与模型组予以等体积蒸馏水灌胃,活膝汤组予以活膝汤灌胃,阳性药物组予以塞来昔布溶液灌胃,每日1次,灌胃4周后留取大鼠膝关节软骨组织标本。HE染色和番红O-固绿染色观察大鼠膝关节软骨细胞病理形态学改变;RT-PCR检测CCL2、CCR2、Caspase-1 mRNA表达;Western blot检测CCL2、CCR2、Caspase-1、p-p65蛋白表达;免疫荧光双重染色定性检测大鼠软骨细胞焦亡情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠软骨退变情况明显加剧,软骨焦亡水平上升,CCL2、CCR2、Caspase-1 mRNA表达水平明显增高(P<0.01),CCL2、CCR2、Caspase-1、p-p65蛋白表达水平明显增高(P<0.01)。与模型组比较,活膝汤组及阳性药物组大鼠软骨退变情况明显改善,软骨细胞焦亡水平下降。CCL2、CCR2、Caspase-1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),CCL2、CCR2、Caspase-1、p-p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与活膝汤组对比,阳性药物组Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论 活膝汤可能通过降低CCL2、CCR2、Caspase-1、p-p65的表达水平,抑制大鼠软骨细胞焦亡,改善大鼠关节软骨的退变情况。

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