27nt-miRNA对氧化低密度脂蛋白介导的血管内皮细胞管腔形成活性减弱的影响及其分子机制

作者：赵燕姣; 李丹; 颜渊鸳; 杨鹏; 罗雪兰; 欧和生^*

来源：中国药学杂志, 2021, 56(12): 971-978.

• 27nt-miRNA
• 人脐静脉内皮细胞
• 氧化低密度脂蛋白
• 管腔形成
• PI3K/Akt/eNOS

目的探讨27nt-miRNA对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和管腔形成能力减弱的影响及相关分子机制。方法将HUVECs分为正常对照组、Ox-LDL组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27nt-miRNA)组和miR-NC组。正常对照组不做任何处理;Ox-LDL组用40μg·mL-1 Ox-LDL作用48 h; 27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组和miR-NC组分别感染27nt-miRNA高表达、27nt-miRNA反义序列和随机阴性序列的慢病毒载体后,再用40μg·mL-1 Ox-LDL作用48 h。采用qRT-PCR法检测27nt-miRNA表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Matrigel实验检测细胞的成管能力;一步法检测细胞的一氧化氮产量;Western blot法和qRT-PCR法检测p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、eNOS的蛋白和(或)mRNA表达水平。结果与miR-NC组相比,27nt-miRNA组细胞27nt-miRNA高表达(P<0.05)、细胞活力下降(P<0.05)、细胞迁移能力降低(P<0.05),且未见管腔样网络结构;此外,27nt-miRNA组细胞NO的产量显著降低(P<0.05),PI3K、Akt与eNOS的mRNA表达量显著降低(P<0.05),p-PI3K、p-Akt与eNOS的蛋白表达量显著降低(P<0.05);anti-27nt-miRNA组细胞的上述指标均较27nt-miRNA组与miR-NC组升高(P<0.05)。结论在Ox-LDL诱导HUVECs损伤后,27nt-miRNA可能通过抑制PI3K/Akt/eNOS信号通路的激活,抑制HUVECs的增殖和迁移,继而抑制血管形成,可能参与血管疾病的病理生理过程。

• 单位
  广西中医药大学; 广西医科大学