耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、表达及其酶学特性

作者：孙军涛; 王洪新; 吕文平; 马朝阳; 娄在祥; 戴易兴

来源：江苏农业学报, 2011, 27(04): 878-882.

• β-1
• 3-1
• 4-葡聚糖酶
• 克隆
• 表达
• 纯化
• 酶学特性

为了获得耐热的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,利用PCR技术从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中扩增β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl),构建重组表达质粒pET30a-bgl转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷酸(IPTG)诱导表达获得重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶,并对纯化后的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行酶学特性研究。结果表明,摇瓶培养的重组基因工程菌的酶活力为80 U/ml,纯化后酶的比活力为4 969 U/mg,是纯化前的54.6倍;酶的分子量为2.6×104左右,最适温度为50℃,最适pH为6.0,在pH 5.0和pH 8.0之间有很好的稳定性,90℃下酶的半衰期(t1/2)为21 min;该酶对燕麦葡聚糖和地衣多糖有很好的专一性。重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶有较好的耐酸、耐热性,在酿造和饲料加工过程中能够保持较高的活性,具有很好的工业应用价值。

• 单位
  江南大学; 食品科学与技术国家重点实验室