Clusterin基因沉默对脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响

作者：张蕴蕴; 周伟; 孙卯; 黄锣; 陈晓品

来源：重庆医科大学学报, 2014, 39(02): 173-177.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2014.02.009

• 簇集蛋白
• 脑胶质瘤
• 放射敏感性
• RNA干扰

目的:研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin,CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法:设计和合成靶向CLU的短发夹RNA(short hairprin RNA,shRNA)序列(CLU shRNA1,CLU shRNA2),并构建到慢病毒的载体plentilox 3.7,以不针对任何基因的shRNA序列作为对照(对照shRNA)。包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞,Real-time PCR法和Western blot法测定CLU mRNA表达和蛋白质表达水平,证实干扰效果。给予不同放射剂量(2、4、6 Gy)处理后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bxomide,MTT)法及流式细胞仪Annexin V/PI法检测脑胶质瘤U87细胞的存活率及凋亡率。Western blot方法筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU mRNA和蛋白质的表达。MTT实验结果显示实验干扰组细胞在不同放射剂量下的脑胶质瘤实验U87细胞的存活率与对照组比较明显下降,差异具有统计学意义(4 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.003;6 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明:4 Gy放疗后2个实验组细胞凋亡率均明显增加,最高达(35.54±0.95)%,较对照组高2倍多,差异具有明显统计学意义(对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000;对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。Western blot法发现CLU沉默可以显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平。结论:CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达,明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性,有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学附属第二医院; 重庆市肿瘤研究所