Cyclophilin D在氧化应激下人视网膜色素上皮细胞中的表达

作者：何媛; 张纯涛; 刘瀛; 王霞; 刘旭; 任媛

来源：眼科新进展, 2016, 36(06): 501-505.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2016.0134

• 氧化应激
• Cyclophilin D
• 视网膜色素上皮细胞
• 环孢素A

目的检测氧化应激下人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞内Cyclophilin D的表达,初步探索RPE细胞氧化损伤保护新靶点。方法培养细胞系ARPE19及人原代RPE细胞,相差显微镜下观察细胞形态,应用激光共聚焦显微镜免疫荧光法鉴定细胞。不同浓度H2O2(0μmol·L-1、100μmol·L-1、500μmol·L-1、1 mmol·L-1)处理细胞24 h后,应用RT-PCR检测Cyclophilin D在细胞内的表达。随后预先在部分细胞中加入3μmol·L-1环孢素A（cyclosporin A,Cs A）处理30 min后再加入不同浓度H2O2(80μmol·L-1、160μmol·L-1、320μmo·L-1)2 h,即Cs A+H2O2组,应用乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）法检测细胞致死率,并与H2O2组的LDH释放量相比较。结果培养的ARPE19和人原代RPE细胞均表达RPE细胞特异性抗体RPE65。100μmol·L-1H2O2处理细胞24 h后Cyclophilin D表达量明显升高,当H2O2浓度增加到500μmol·L-1时,Cyclophilin D表达量降低,1 mmol·L-1H2O2处理时,Cyclophilin D表达水平未见增加。在各H2O2组组间,LDH的释放量随着H2O2浓度的升高而增加;与H2O2组相比,Cs A+H2O2组LDH的释放水平明显降低（P<0.05）。结论氧化应激下RPE细胞内Cyclophilin D的表达升高,该蛋白表达的增加可能进一步导致氧化应激下细胞的死亡,Cs A可能成为RPE细胞保护的新策略。

• 单位
  西安医学院第二附属医院