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摘要
[目的]观察炎性环境下小白菊内酯(PAR)对肌腱干细胞成骨分化的作用,探索其对骨肌腱接点损伤修复的作用及其信号通路。[方法]利用胶原酶法结合低密度接种法分离肌腱干细胞,体外验证分离细胞的成骨、成脂分化能力;TNF-α构建的炎性环境下,设置不同浓度组小白菊内酯(PAR)刺激人肌腱干细胞,用qRT-PCR检测炎症相关基因以及肌腱、成骨相关基因的表达,及Western Blot检测Run x2、β-catenin蛋白的表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人肌腱组织分离培养出干细胞。qRT-PCR检测显示,100 ng/ml TNF-α可引发炎症反应,PAR能抑制炎性相关基因COX-2、HIF-2α的表达,促进了成骨相关基因Run x2、OPN的表达,与TNF-α组对比差异有统计学意义(P<0.05);而肌腱相关基因Col I、Scleraxis的表达较复杂,与TNF-α组相比,下调了Col 1α水平,却上调Scleraxis水平。Western Blot检测结果显示,与TNF-α组对比,PAR显著增加蛋白Run x2、β-catenin的表达(P<0.05)。肌腱干细胞在体外可被诱导向成骨细胞和脂肪细胞分化。镜下观察茜素红S染色,PAR组均有红色钙盐沉积,相比之下对照组及TNF-α组基本无或出现少量钙盐沉积。[结论]炎性环境下小白菊内酯能控制TNF-α引起的炎性反应并可能通过β-catenin信号通路促进肌腱干细胞的成骨分化。
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