康柏西普非还原SDS-PAGE纯度方法研究

作者：于传飞; 张峰; 刘爱兵; 张亚飞; 罗祖秀; 陈粟; 柯潇; 王兰^*

来源：药学学报, 2018, 53(12): 2099-2103.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2018-0555

• 非还原SDS-PAGE
• 线性
• 上样量

建立非还原SDS-PAGE纯度检测方法,以研究康柏西普降解物或片段的含量。本文针对凝胶的筛选、凝胶成像系统的比较、主带灰度值线性范围和脱色条件开展研究,确定了康柏西普非还原SDS-PAGE纯度测定方法的实验条件。结果显示:4%～15%梯度浓度胶分离效果好,带型清晰平整;高分辨率的凝胶成像系统能使主带、杂带响应峰基线分离;当上样量≤3μg时,主带灰度值线性好,因此,以3μg作为非还原SDS-PAGE纯度方法的上样量;脱色条件确定为60min更换一次脱色液,每次100mL,脱色时间不超过3h。所建立的非还原SDS-PAGE纯度测定方法能够更客观测定康柏西普的纯度,该方法经过验证后,以补充材料的形式提交美国FDA,为康柏西普在美国直接进入临床Ⅲ期研究奠定了质量基础。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 成都康弘药业集团股份有限公司