双报告基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

作者：赵智凝; 周强; 李艳君; 郭振军; 何芙蓉

来源：现代生物医学进展, 2014, 14(23): 4413-4416.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2014.23.004

• 报告基因
• 荧光蛋白
• 荧光素酶
• T2A序列

目的:构建绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶共同高效表达的双报告基因真核表达载体。方法:将增强型绿色荧光蛋白基因和海肾荧光素酶基因以昆虫病毒T2A序列相连接而后克隆进入pcDNA3.1(-)质粒,构建双报告基因真核表达载体。将该载体转染至COS-7细胞,通过荧光显微镜观察、照度计定量分析检测绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶生物活性,Western Bolt检测T2A序列自剪切效率。结果:双报告基因真核表达载体能够同时表达非融合的绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶,与单独表达载体产物具有相似的生物活性和表达效率。结论:双报告基因真核表达载体建立成功,为基因表达调控等相关领域研究提供辅助工具。

• 单位
  解放军第四五一医院; 第四军医大学