人源性DNA聚合酶β原核蛋白的表达、蛋白纯化及其功能初探

作者：仲召阳; 张志敏; 李梦侠; 戴楠; 曾林立; 王东

来源：现代预防医学, 2012, (04): 930-932+935.

• DNA聚合酶β
• 原核表达
• 蛋白纯化 Nm23-H1
• Prokaryotic expression
• Protein purification

[目的]利用人源性DNA聚合酶β原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化DNA聚合酶β蛋白,并检测蛋白活性。[方法]将重组质粒pCR-BluntII-TOPO-DNApolβ转化入大肠杆菌E.coli中,IPTG诱导其表达并鉴定。利用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到人源性DNApolβ融合蛋白,纯化的融合蛋白用EK酶酶切后,通过Ni2+柱纯化获得高纯度的人源性DNApolβ蛋白,电泳迁移率变动分析实验检测DNApolβ融合蛋白的AP修复活性。[结果]转化入大肠杆菌E.coliRosetta2的DNApolβ诱导表达最好,蛋白表达量高。金属螯合层析纯化后得到融合蛋白经EK酶切后得到高纯度的人源性D...

• 单位
  第三军医大学大坪医院