基因沉默脂肪酸合酶下调程序性死亡因子受体配体1增强非小细胞肺癌放疗敏感性

作者：沈明敬; 刘沙沙; 徐中华; 徐卫华; 蒋堪秋; 丁启峰; 邢鹏飞; 陈勇兵; 徐忠恒^*

来源：中华实验外科杂志, 2020, 37(09).

• 非小细胞肺癌
• 放疗敏感性
• 脂肪酸合酶
• 程序性死亡因子受体配体-1

目的探讨脂肪酸合酶在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达以及调控放疗敏感性的作用与机制。方法选取2015年5月至2018年12月苏州大学附属第二医院NSCLC临床标本, 免疫组织化学(IHC)检测肺癌组织脂肪酸合酶(FASN)蛋白表达。以A549、H226为研究对象, 采取小剂量累积放疗方法培养相应的放疗耐受株A549R、H226R。蛋白电泳和油红染色分别检测细胞株FASN和脂肪的表达。构建FASN基因沉默的A549R-siFASN、H226R-siFASN后, 12 h抽提RNA, 24 h抽提蛋白质, 经蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测基因沉默组和对照组细胞FASN表达, 经单细胞克隆实验检测细胞对放疗的敏感性变化。最后, 经免疫荧光检测A549R-siFASN、H226R-siFASN及相应对照组程序性死亡因子受体配体-1(PD-L1)表达。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织比较, FASN蛋白在肺癌组织中显著高表达[(13.20±1.83)个/视野比(29.40±3.77)个/视野, t=3.869, P<0. 05]。与放疗敏感肺癌组织比较, FASN蛋白在放疗不敏感肺癌组织中显著高表达[(25.90±3.43)个/视野比(39.50±5.06)个/视野, t=2.225, P<0.05];与亲本细胞株A549P、H226P比较, FASN蛋白及脂肪颗粒在放疗耐受株A549R、H226R中表达显著上升[(2.38±0.60)个/视野比(5.88±0.81)个/视野, t=3.477, P<0.05;(4.25±0.53)个/视野比(7.50±0.76)个/视野, t=3.529, P<0.05];与对照组A549R-sc、H226R-sc比较, FASN基因沉默的A549R-siFASN[mRNA相对表达量(1.00±0.11比0.35±0.08, t=12.074, P<0.05]和H226R-siFASN[mRNA相对表达量(1.00±0.09比0.25±0.01, t=14.653, P<0.05]对放疗的敏感性显著上升, 4、6 Gy时A549R-sc/siFASN存活指数为0.82±0.15比0.35±0.07、0.69±0.09比0.3±0.05(t=3.127、6.652, P<0.05), 2、4、6 Gy时H226R-sc/siFASN存活指数为(0.77±0.11比0.51±0.12、0.65±0.08比0.3±0.1、0.53±0.07比0.22±0.04, t=6.887、9.571、10.680, P<0.05)。与对照组A549R-sc、H226R-sc比较, FASN基因沉默的A549R-siFASN、H226R-siFASN中PD-L1表达显著下降。结论 NSCLC中FASN表达与放疗敏感性显著相关, PD-L1为其下游靶基因。靶向抑制FASN可以增强NSCLC对放疗的敏感性, 是一个有潜力的基因治疗靶点。

• 单位
  苏州大学附属第一医院; 苏州大学附属第二医院