一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法

作者：王先良; 王小利; 苏艳华; 张迟; 张莉君; 李芳; 李柏生; 李晓波; 徐淑雷; 李媛媛; 徐顺清

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2005, 21(03): 420-425.

DOI：10.3969/j.issn.1007-7626.2005.03.022

• 蛋白质检测
• 适体
• 酶切保护分析
• 实时PCR
• 凝血酶

以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR .分别建立连接产物标准品浓度与Ct 值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct 值之间的方程为y =- 2 95x + 33 6 5 (R2 =0. 990 ,P <0 .0 1) ;凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y =0 94x - 0 . 2 9(R2 =0 . 998,P <0 . 0 1) ,还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.

• 单位
  华中科技大学同济医学院