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摘要
基于前期塞内卡病毒（SVA）内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）的互作组学数据，本研究首先利用生物素标记RNA亲和捕捉技术和RNA免疫共沉淀试验，证实核不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)与SVA基因组互作，且利用MTS试验证实敲降或过表达hnRNP K对细胞活性影响不显著。为深入探究hnRNP K在SVA复制过程中的功能，本研究利用Western-blot和TCID50试验检测hnRNP K蛋白对SVA病毒蛋白表达和病毒滴度的影响，结果显示，敲降hnRNP K显著降低病毒蛋白VP2的表达量及病毒滴度，而过表达hnRNP K则显著增加VP2表达量及病毒滴度。利用间接免疫荧光和核质分离试验观察病毒感染对hnRNP K亚细胞定位的影响，发现SVA感染可诱导hnRNP K由细胞核向细胞质移位。通过双荧光素酶报告基因试验检测hnRNP K对帽依赖性翻译和SVA IRES依赖性翻译活性的影响，结果表明，敲降和过表达hnRNP K蛋白均对帽依赖性翻译活性无显著影响，敲降hnRNP K显著降低SVA IRES依赖性翻译活性，而过表达hnRNP K则显著增强IRES翻译活性。综上所述，本研究证实hnRNP K是SVA的关键反式作用因子，正调控病毒IRES依赖性翻译及病毒复制，为深入了解小RNA病毒蛋白翻译和复制的分子机制提供了新的见解。
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