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摘要
目的探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制, 为肝癌的防治提供新思路。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测;将肝癌细胞系随机分为空白组, AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组, 其中空白组表示肝癌细胞不进行任何干预, AURKAPS1组中的肝癌细胞仅接受AURKAPS1干预, RAC1组为转染RAC1的肝癌细胞, AURKAPS1+RAC1组表示同时转染AURKAPS1和RAC1, 采用实时荧光定量PCR技术检测4组细胞中RAC1的表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术和Transwell转移法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移能力;蛋白质免疫印迹法测定各组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)和RAC1蛋白表达;间接免疫荧光检测细胞中ERK的表达。组间独立样本采用t检验, 多组间进行F检验、LSD检验。结果肝癌组织中RAC1 mRNA的表达量(0.98±0.08)显著高于正常人肝上皮细胞组织(0.72±0.03), 差异有统计学意义(t=30.431, P<0.05);AURKAPS1组(1.03±0.10)、RAC1组(1.05±0.09)及AURKAPS1+RAC1组(1.16±0.07)的RAC1 mRNA的表达量均高于空白组(1.16±0.07), AURKAPS1+RAC1组的RAC1 mRNA表达量也显著高于分别转染AURKAPS1、RAC1的肝癌细胞组, 差异有统计学意义(F=5.991, P<0.05);CCK-8法检测肝癌细胞的增殖, 随着时间的增加, 除空白组, 其余3组的吸光度(A)450值均增加, 96 h后AURKAPS1+RAC1组的A450值显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F0 h=2.941, F24 h=26.454, F48 h=104.60, F72 h=319.555, F96 h=564.65)P<0.05;AURKAPS1组[(5.89±3.82)%]、RAC1组[(5.81±3.85)%]及AURKAPS1+RAC1组[(4.23±4.15)%]的总凋亡率均低于空白组[(6.75±3.36)%], 且AURKAPS1+RAC1组的总凋亡率显著低于RAC1、AURKAPS1组, F=77.369, P<0.05;AURKAPS1组(131.24±9.25)、RAC1组(129.87±9.41)及AURKAPS1+RAC1组(153.62±7.48)的穿膜细胞数均高于空白组(117.64±10.53), 且AURKAPS1+RAC1组的穿膜细胞数显著高于RAC1组及AURKAPS1组(F=91.118, P<0.05);Western blot法检测4组肝癌细胞的ERK及RAC1蛋白表达, 转染后3组的ERK及RAC1蛋白的相对表达量均高于空白组, 且AURKAPS1+RAC1组的ERK及RAC1蛋白的相对表达量显著高于RAC1组及AURKAPS1组(Fβ-actin=0.000, FERK=68.342, FRAC1=52.868, P<0.05);AURKAPS1组[10(40.00)]、RAC1组[11(44.00)]及AURKAPS1+RAC1组[19(76.00)]的ERK阳性率均高于空白组[4(16.00)], 且AURKAPS1+RAC1组的ERK阳性率显著高于RAC1组及AURKAPS1组(χ2=6.650, P<0.05)。结论长链非编码RNA AURKAPS1能够使RAC1蛋白的表达量增加, 活化ERK信号通路, 进一步影响肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移, 促进肝癌细胞的生长和进展。
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