结核分枝杆菌多聚磷酸盐激酶2核酸适配体的抗结核效果评价

作者：杨扬; 李岱容; 黎友伦; 陈雨晗; 万秋; 刘静姝

来源：上海交通大学学报 (医学版), 2018, 38(01): 36-41.

DOI：10.3969/j.issn.1674-8115.2018.01.007

• 多聚磷酸盐激酶
• 核酸适配体
• 结核分枝杆菌
• 抑菌活性

目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果。方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化树。通过酶联寡核苷酸分析(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)测定PPK2核酸适配体与MTB标准株H37Rv、卡介苗(BCG)、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的结合亲和力。将PPK2核酸适配体加入血清中孵育24 h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在血清中的生物稳定性。采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H37Rv的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。将H37Rv与1μmol/L的PPK2核酸适配体在罗氏培养基上培养10 d,观察菌落生长情况。运用酶标仪测定与不同浓度的PPK2核酸适配体共培养10 d后H37Rv菌液的D(600 nm)值,观察PPK2核酸适配体对H37Rv生长的影响。结果·生物信息学方法构建的PPK2进化树显示,H37Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近。ELONA测定结果显示PPK2核酸适配体能与H37Rv选择性结合。琼脂糖凝胶电泳分析显示PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8 h。PPK2核酸适配体对H37Rv的MIC为50 nmol/L。罗氏培养基菌落生长结果显示PPK2适配体对H37Rv生长具有抑制作用。生长抑制试验表明随着PPK2核酸适配体浓度增加,H37Rv的D(600 nm)呈现下降趋势,说明PPK2核酸适配体对H37Rv生长存在抑制作用。结论·PPK2核酸适配体对体外H37Rv表现出良好的抑菌活性。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院