人颗粒溶素的原核表达

作者：王晚霞; 兰喜; 徐向红; 居军; 柳纪省

来源：兰州大学学报(医学版), 2009, (04): 35-38.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2009.04.005

• 颗粒溶素
• 原核表达
• 蛋白印记 ranulysin
• prokaryotic expression
• Wester blotting

目的克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达。方法体外培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素的基因片段,鉴定正确后构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,并将其转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定融合蛋白的正确性。结果成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量分别约为31和37 kD的融合蛋白。结论利用原核表达体系成功表达了不同相对分子质量的颗粒溶素融合蛋白。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃省人民医院