小鼠脂联素重组腺相关病毒载体的构建

作者：张淼; 李芳萍; 陈黎红; 傅静奕; 严励; 傅祖植

来源：中国临床康复, 2006, (20): 74-76.

• 遗传载体
• 腺病毒科遗传学
• 逆转录聚合酶链反应

目的:构建脂联素重组腺相关病毒载体,为进一步研究脂联素的功能提供基础。方法:实验于2003年在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心进行。以带有小鼠脂联素基因的质粒pcDNA3.0-Ad为模板,聚合酶链反应克隆脂联素基因,并将聚合酶链反应扩增产物定向克隆于pAAV-MCS载体,重组AAV-MCS-Ad质粒经双酶切和测序鉴定。随后采用磷酸钙转染法将pAAV-MCS-Ad、pAAV-RC,pAAV-Helper质粒共转染AAV-293细胞,包装得到重组腺相关病毒穴rAAV-Ad雪。回收病毒原液,采用PEG8000和氯仿纯化浓缩病毒。SDS-PAGE及透射电镜鉴定纯化的病毒,并采用Southernb...

• 单位
  贵阳医学院附属医院; 中山大学