大质粒DNA疫苗pSVK-CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定

作者：吴昊; 王宇; 朱晓明; 阎瑾琦; 张巍; 徐元基; 田仁礼; 殷小涛; 刘姣; 王琳; 于继云

来源：生物技术, 2013, 23(1): 48-52.

DOI：10.3969/j.issn.1004-311X.2013.01.014

• 宿主菌
• DNA疫苗
• 高稳定性
• XL-10 Gold

目的:从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌,鉴定其达到中试要求.方法:将疫苗质粒pSVK-CAVA(14.7kb)转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构.对基因工程菌进行生化检测,并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测,同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力.选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存,将原始种子库扩大培养,逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库.通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基.结果:确定了XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的宿主菌,基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好,质粒能在293T细胞中体外表达.筛选出TB培养基为基础培养基,质粒容积产量达到9.9mg/L,比LB培养基提高了接近1倍.结论:该研究筛选出大肠杆菌XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗的宿主菌,解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题,并对基础培养基讲行了初步优化.

• 单位
  公共卫生学院; 军事医学科学院基础医学研究所; 中南大学; 基础医学院