摘要
目的:研究蛋白酶体活化复合物3(proteasome activator complex subunit 3,PSME3)对三阴性乳腺癌侵袭及转移的影响及其机制。方法:收集临床三阴性乳腺癌患者标本,免疫组织化学检测PSME3蛋白的表达;以三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231为对象,利用慢病毒包装系统构建PSME3过表达及干扰稳定株。Real-time PCR法检测PSME3的mRNA表达,Western blot检测PSME3的蛋白表达。实验分为PSME3过表达(expression of PSME3,exPSME3)组、PSME3干扰(short hairpin RNA targeting PSME3,shPSME3)组和野生型对照组。在以Western blot法进行稳定株鉴定时,为排除载体本身对PSME3表达的影响,特增加PSME3过表达阴性对照(expression negative control,exNC)组、PSME3干扰阴性对照(short hairpin RNA targeting negative control,shNC)组。划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot进一步检测迁移相关蛋白血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在各组的表达情况。细胞爬片免疫荧光与Western blot分别检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)及其活性基团,磷酸化的P65蛋白(phosphorylated-P65,P-P65)的表达。结果:免疫组织化学结果显示PSME3在三阴性乳腺癌患者肿瘤组织表达明显高于癌旁组织(t=36.700,P=0.000)。划痕实验结果显示exPSME3组的迁移能力高于对照组(P=0.000),shPSME3组的迁移能力低于对照组(P=0.009)。迁移相关蛋白检测示VEGF-A、MMP9均在exPSME3组高表达,在shPSME3组低表达,与对照组相比有统计学差异。Transwell实验结果显示exPSME3组的侵袭能力高于对照组(P=0.000),shPSME3组的侵袭能力低于对照组(P=0.000)。细胞爬片免疫荧光结果提示各组间NF-κB蛋白表达无明显差异,而exPSME3组P-P65表达明显高于对照组(P=0.001),shPSME3组P-P65表达低于对照组(P=0.001),Western blot检测结果与之一致。结论:PSME3-NF-κB途径可介导三阴性乳腺癌的侵袭及转移。
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单位生物治疗国家重点实验室; 重庆医科大学附属第一医院