钙黏蛋白17对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其PI3K/AKT/mTOR信号通路调节机制

作者：刘蒙; 黄晓东; 韩峥; 朱庆曦; 谭洁; 田霞^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(04): 1008-1017.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230423

• 钙黏蛋白17
• 结直肠肿瘤
• 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的：探讨钙黏蛋白17 (Cadherin-17)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和凋亡的影响，阐明其可能的机制。方法：构建Cadherin-17基因过表达及小干扰质粒，包装成慢病毒，转染至SW480细胞，构建过表达和干扰病毒稳转株。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中Cadherin-17 mRNA和蛋白表达水平，验证转染效率并鉴定稳转株。SW480细胞分为对照组、空载体组、 Cadherin-17过表达质粒(OV-Cadherin-17)组和Cadherin-17小干扰质粒(si-Cadherin-17)组，CCK-8法检测各组细胞增殖活性，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞中Cadherin-17、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞，将细胞分为对照组、 LY294002组、 OV-Cadherin-17+LY294002组和si-Cadherin-17+LY294002组，检测各组细胞增殖活性、细胞凋亡率及细胞中Bcl-2、 Bax、 Cyt-c、 Caspase-3和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果：RT-qPCR和Westernblotting法检测，OV-Cadherin-17和si-Cadherin-17转染和稳转株构建成功。与对照组比较，OV-Cadherin-17组细胞增殖活性明显升高(P<0.01)，细胞凋亡率明显降低(P<0.01)，细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01)，磷酸化PI3K (p-PI3K)、磷酸化AKT (p-AKT)和磷酸化mTOR (p-mTOR)蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17组和LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01)，细胞凋亡率明显升高(P<0.01)，细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01)；与LY294002组比较，OV-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显升高(P<0.01)，细胞凋亡率明显降低(P<0.01)，细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01)，细胞凋亡率明显升高(P<0.01)，细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论：Cadherin-17可促进CRC细胞增殖，抑制CRC细胞凋亡，其机制可能与Cadherin-17调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活有关。

• 单位
  武汉市第三医院