川芎嗪对t-BHP致PC12细胞损伤的保护及机制

作者：黄伟; 李涵; 李本岳; 张洋; 关莉^*; 王奇^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(11): 67-72.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20191102

• 川芎嗪
• 神经保护
• PC12细胞
• 叔丁基过氧化氢(t-BHP)
• 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)

目的:研究川芎嗪(TMP)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法:培养PC12细胞,孵育不同浓度的川芎嗪(10,25,50,100,200μmol·L-1),12 h后采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)确定川芎嗪的保护浓度。随后将PC12细胞分为空白组,t-BHP组,TMP组。空白组加入培养基,t-BHP组加入t-BHP(200μmol·L-1),TMP组加入TMP(25,50,100μmol·L-1)预处理12 h后加入t-BHP(200μmol·L-1)。共作用6 h后采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、活性氧(ROS)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Akt,磷酸化Akt(p-Akt)及m TOR,p-mTOR的表达情况。结果:与空白组比较,t-BHP组细胞生存率降低(P<0.01),与t-BHP组比较,25,50,100μmol·L-1的川芎嗪促进细胞增殖(P<0.05,P<0.01),其中50μmol·L-1组的细胞增殖率最高(P<0.01);与空白组比较,t-BHP组LDH的释放量,ROS和MDA含量显著增加(P<0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P<0.01),与t-BHP组比较,TMP组LDH的释放量,ROS和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),SOD和GSH-Px的活性显著升高(P<0.05,P<0.01);Western blot表明与空白组比较,t-BHP组中p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平明显下降(P<0.01),Bcl-2/Bax值明显降低(P<0.01),与t-BHP组比较,TMP(50μmol·L-1)组中p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平明显上升(P<0.05),Bcl-2/Bax值明显上升(P<0.05)。另外LY294002(PI3K蛋白抑制剂)处理减弱了这些变化。结论:川芎嗪通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路保护t-BHP诱导的PC12细胞损伤。

• 单位
  广州中医药大学; 基础医学院