胰高血糖素样肽-1受体激动剂融合蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

作者：高雪峰; 王婉如; 郑伟峰; 杨军; 张艳丽; 马亚茹; 陈勇^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(04): 454-463.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003584

• 胰高血糖素样肽-1受体激动剂
• 融合蛋白
• 反相高效液相色谱
• 纯度

目的 建立用于检测胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂融合蛋白纯度的反相高效液相色谱（reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）法，并进行验证。方法 采用Agilent ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×150 mm)分析柱和ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×12.5 mm)保护柱。色谱条件：流动相A液：0.1%三氟乙酸水溶液；流动相B液：0.1%三氟乙酸的乙腈溶液；上样体积：100μL；工作流速：0.50 mL/min;A相溶液平衡系统至基线平稳，开始进样；0～5 min:0～50%B;5～15 min:50%～60%B;15～20 min:60%～100%B;20～30 min:100%B;8 min:100%A；检测波长：280 nm；柱温箱温度：40℃。验证方法的系统适用性、专属性、灵敏度、重复性、中间精密性和耐用性。采用建立的方法检测6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度。结果 理论塔板数为26 891，对称因子为0.64；空白对照（稀释液）、阴性对照[抗凝血酶-Ⅲ（antithrombin-Ⅲ，AT-Ⅲ）及睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor,CNTF）]对色谱图无干扰峰，GLP-1受体激动剂融合蛋白与阴性对照分离度> 1.5；方法的灵敏度为4.8μg/mL；重复性验证峰面积百分比的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.35%，保留时间RSD为0.07%；中间精密性验证峰面积百分比RSD为0.75%，保留时间RSD为0.07%；不同系统温度下测定峰面积百分比RSD为3.94%，保留时间RSD为0.10%。6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度均≥95.0%。结论 建立的用于检测GLP-1受体激动剂融合蛋白纯度的RP-HPLC法具有良好的系统适用性、灵敏度、精密性和耐用性，可用于GLP-1受体激动剂融合蛋白的质量控制。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司