miR-155对乙型肝炎病毒复制及PTEN表达的影响

作者：谢聪; 任广立^*; 许蔓春; 张卫云; 张速林; 蔡启茵; 林永敏

来源：中华肝脏病杂志, 2018, 26(07): 489-494.

• 肝炎病毒, 乙型
• 干扰素γ
• PTEN
• 微小NRA155

目的构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155, 探讨其在乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠中对HBV复制及PTEN基因表达的调控作用。方法 PCR扩增mmu-miR-155的前体基因片段(pre-mmu-miR-155), 双酶切后连接到pmR-mCherry载体上, 通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性。将重组载体采用高压尾静脉法注入HBV转基因小鼠体内作为实验组, 同时设空质粒组(注入pmR-mCherry空质粒)、空白组(注入等体积磷酸盐缓冲液), 7 d后qPCR检测各组细胞miR-155的表达情况, 14 d采用酶联免疫吸附法检测干扰素(IFN)γ表达量;1个月后qPCR检测肝内细胞因子信号抑制物(SOCS)1、PTEN基因mRNA表达量及Western blot检测肝内SOCS1、PTEN、HBX蛋白表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验;三组数据比较采用方差分析, 进一步两两比较采用LSD法。结果经菌落PCR、双酶切和测序证实, pre-mmu-miR-155基因片段成功插入pmR-mCherry载体中。注入质粒7 d后, 实验组表达miR-155的水平明显升高(t = 8.90, P < 0.01);注入质粒14 d后, 实验组IFNγ表达量较空白组升高(F = 26.58, P < 0.01);注入质粒30 d后, 实验组肝内SOCS1、PTEN mRNA(FSOCS1 mRNA = 19.72, P < 0.01;FPTEN mRNA = 7.38, P < 0.05)及蛋白表达水平(FSOCS1 = 50.30, P < 0.01;FPTEN = 129.00,P < 0.01)均下降, 同时HBX表达水平下降(FHBX = 77.97, P < 0.01)。结论成功构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155, 该重组载体可稳定表达mmu-miR-155;miR-155可以通过下调SOCS1表达, 进而促进IFNγ的表达, 增强HBV转基因小鼠的抗HBV能力。与此同时, miR-155可下调PTEN的表达, 有潜在的促进肝癌发生的可能。

• 单位
  广州医科大学附属第二医院; 广州军区广州总医院