摘要
目的探讨微小RNA-375(miR-375)靶向矮小同源盒基因(SHOX2)对肺癌细胞吉西他滨敏感性的影响。方法体外培养非小细胞肺腺癌细胞株A549细胞,作为空白对照组;转染miR-375模拟物质粒或空质粒至A549细胞,作为miR-375过表达组和阴性对照组。采用噻唑蓝法和Annexin V/PI双染法检测吉西他滨对各组细胞增殖和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告基因方法验证miR-375与SHOX2的靶向关系。应用逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中miR-375和SHOX2基因的表达量;采用蛋白质印迹法检测各组细胞中SHOX2蛋白的表达量。采用荧光免疫检测法检测各组细胞β-连环蛋白表达情况。结果 miR-375过表达组miR-375表达量明显高于空白对照组和阴性对照组[(1. 45±0. 11)比(1. 00±0. 05)、(0. 97±0. 11)](均P <0. 05);且经不同浓度吉西他滨作用48 h后,miR-375过表达组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05);吉西他滨对miR-375过表达组A549细胞的半数抑制浓度为4. 405μmol/L。4. 405μmol/L吉西他滨作用24 h后,miR-375过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组[(28±4)%比(12±4)%、(14±4)%](P <0. 05)。经双荧光素酶报告基因分析,SHOX2是miR-375的下游靶基因。miR-375过表达组SHOX2 m RNA和蛋白表达量均明显低于空白对照组和阴性对照组[(0. 39±0. 08)比(1. 00±0. 07)、(1. 02±0. 09);(0. 42±0. 07)比(0. 97±0. 10)、(1. 05±0. 12)](均P <0. 05)。与空白对照组和阴性对照组相比,miR-375过表达组细胞中β-连环蛋白表达量和进入细胞核的量明显减少。结论上调miR-375可抑制SHOX2激活Wnt/β-连环蛋白信号通路,从而增加A549细胞株对吉西他滨的敏感性。
-
单位华中科技大学; 华中科技大学同济医学院附属梨园医院