Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶的酶学特性及3-氰基吡啶调控机理的研究

作者：郭静静; 郭磊磊; 赵云岫; 戴亦军^*

来源：生物技术通报, 2019, 35(08): 51-58.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0027

• 草木樨剑菌
• 静息转化
• 烟酰胺酶
• 酶学特性

克隆和异源表达固氮菌Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶(NAMase),研究其酶学特性,并探究3-氰基吡啶(3-CP)对该酶的调控机制。PCR扩增获得E. meliloti 1021烟酰胺酶基因(nam)序列,构建含nam的重组质粒并导入Escherichia coli Rosetta(DE3)中异源表达,用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,探究温度、pH、有机溶剂及金属离子对NAMase活性的影响,并对烟酰胺酶进行了固定化研究。结果显示,克隆得到长636 bp的nam,编码的蛋白分子量为22.6 kD,等电点(PI)为5.5。NAMase的最适pH为7.0,在30-50℃温度范围内孵育2 h酶活维持在97.1%以上,最适温度在30-70℃。Ag2+和异戊醇对NAMase的活性抑制率最大。在E. meliloti 1021野生菌株及NAMase过表达菌株转化烟酰胺的过程中3-CP会抑制烟酸的产量,这种效应并非底物抑制作用。

• 单位
  江苏省微生物与功能基因组学重点实验室; 南京师范大学; 江苏省微生物资源产业化工程技术研究中心; 生命科学学院; 南京师范大学中北学院