非洲猪瘟病毒pE301R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定

作者：刘学敏; 张元峰; 王永琦; 康力; 黄丽; 翁长江

来源：中国预防兽医学报, 2022, 1-7.

• 非洲猪瘟病毒
• pE301R蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

以ASFV HLJ/8分离株基因组DNA为模板扩增E301R基因并构建了重组表达质粒pET-28a-E301R。将该质粒转化BL21（DE3）感受态细胞后，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达和纯化pE301R。SDS-PAGE及Western blot (WB) 结果表明，利用原核表达系统成功地表达和纯化了pE301R，并且纯化的His-tagged-pE301R蛋白能被anti-His 单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）特异性识别。将纯化的pE301R免疫BALB/c小鼠，随后将小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经ELISA筛选获得了一个能够分泌抗 pE301R抗体的杂交瘤细胞株8B3，其分泌的抗pE301R mAb（8B3 mAb）是IgG1亚型，该抗体识别的抗原表位位于pE301R N端的1～20氨基酸（aa）。WB、间接免疫荧光 (IFA) 和免疫沉淀 (IP) 试验结果表明，8B3 mAb能够特异性地识别在HEK293T细胞中表达的Flag-pE301R和ASFV HLJ/18感染的肺泡巨噬细胞产生的pE301R，且可以用于免疫沉淀实验。这些研究结果为进一步研究pE301R的功能奠定坚实的基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所