牛星状病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：师志海; 王文佳; 张彬; 孟红丽; 王亚州; 金磊; 兰亚莉^*; 徐照学^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(01): 50-55.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.01.09

• 牛星状病毒
• ORF1a基因
• 实时荧光定量PCR
• 犊牛腹泻

牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法。根据BAstV流行株的ORF1a基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法。结果表明,该检测方法的Ct值与标准品模板在1.36×101～1.36×108拷贝/μL线性关系良好,相关系数R2=0.999,扩增效率为93.79%;该方法可特异性检出BAstV,对犊牛腹泻其他相关病原呈阴性;最低检测下限为13.6拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月至2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本进行检测,BAstV的检出率为18.1%(40/221),采样场阳性率为100.0%(14/14)。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BAstV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

• 单位
  医药学院; 河南省农业科学院; 河南牧业经济学院