A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达

作者：李登科; 刘新生; 方玉珍; 潘丽; 吕建亮; 张中旺; 周鹏; 蒋守田; 张永光; 王永录

来源：中国兽医科学, 2014, 44(09): 881-886.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2014.09.002

• A型口蹄疫病毒
• 多抗原表位
• Sf9细胞
• 表达

为构建A型口蹄疫病毒(FMDV)多抗原表位杆状病毒表达载体,将A型FMDV上5个B细胞表位(VP1140-160aa、VP270-80aa、VP352-67aa、3B29-42aa和3D16-30aa)和4个辅助性T细胞表位(VP1200-213aa、VP420-34aa、3A21-35aa和3D346-370aa)通过人工合成的方法串联起来构建复合多表位基因B。然后将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB。将酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pFastBac HTB-B转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将PCR鉴定正确的重组杆状病毒质粒利用CellfectinⅡReagent转染至Sf9细胞。通过间接免疫荧光试验和Western-blot检测表达情况。结果显示,能够得到与A型FMDV猪抗阳性血清结合的蛋白,大小约为22.3ku,与预期结果相符。结果表明,成功构建了A型FMDV多抗原表位杆状病毒表达载体,并在昆虫细胞中正确表达,为下一步蛋白纯化奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室