微小RNA-20b-5p通过靶向NFKBIZ基因调控急性肺损伤中巨噬细胞极化和铁死亡

作者：钟颖; 彭琴; 林相龙; 程荔峡; 罗辉; 吴斌华^*; 莫桂熙; 莫坚^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(08).

• 急性肺损伤
• 巨噬细胞
• 极化
• 铁死亡
• 微小RNA

目的探讨微小RNA(miR)-20b-5p在急性肺损伤中调控巨噬细胞极化与铁死亡的具体作用机制。方法以脂多糖和干扰素-γ(IFN-γ)诱导RAW264.7细胞后, 采用免疫印迹法和流式细胞术检测miR-20b-5p、miR-20b-5p抑制剂和NFKBIZ (NFKB inhibitor Zeta)对巨噬细胞极化指标诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与CD86表达的影响。通过双荧光素酶报告基因检测证实miR-20b-5p与NFKBIZ之间的相互调控关系。用流式细胞仪和免疫印迹法分别检测miR-20b-5p对巨噬细胞内活性氧(ROS)和铁死亡相关基因表达的调控。构建急性肺损伤动物模型, 研究miR-20b-5p对肺组织损伤的保护作用。两组间差异比较采用t检验, 3组或以上的组间差异采用方差分析。结果经脂多糖和IFN-γ处理6、12、18、24 h后, RAW264.7细胞向M1极化(NC比miR-20b-5p:26.00±2.65比52.67±2.52, t=12.650, P<0.001), miR-20b-5p表达水平低于NC组[0 h比6 h:(101.00±3.61)%比(42.65±1.61)%、0 h比12 h:(101.00±3.61)%比(44.93±1.29)%、0 h比18 h:(101.00±3.61)%比(56.10±1.09)%、0 h比24 h:(101.00±3.61)%比(51.94±0.42)%, 0 h比6 h:t=25.600, 0 h比12 h:t=25.36, 0 h比18 h:t=20.65, 0 h比24 h:t=23.41, 均P<0.001]。miR-20b-5p的过表达能抑制巨噬细胞iNOS和CD86蛋白表达水平(iNOS:97.33±1.53比22.77±4.14、CD86:101.67±2.52比33.30±6.00, iNOS:t=23.230, CD86:t=21.300, 均P<0.001), 下调miR-20b-5p的表达则上调巨噬细胞iNOS和CD86蛋白表达水平(iNOS:97.33±1.53比344.67±6.51、CD86:101.67±2.52比214.00±7.55, iNOS:t=58.300, CD86:t=26.480, 均P<0.001)。免疫印迹法和双荧光素酶实验的结果表明miR-20b-5p是通过直接靶向NFKBIZ基因发挥上述作用。此外, miR-20b-5p的过表达显著抑制LPS诱导的ROS水平(37.60±1.82比17.50±0.97, F=180.400, P<0.0001), 并上调NRF2和GPX4蛋白表达水平(NRF2:101.00±7.22比277.19±13.49、GPX4:100.00±5.98比178.24±8.99, NRF2:F=375.900, GPX4:F=109.300, 均P<0.001)。通过对急性肺损伤动物模型的研究, miR-20b-5p显著抑制肺组织损伤, 肺损伤指标显著下调(3.45±0.18比1.25±0.06, t=20.080, P<0.001)。结论 miR-20b-5p可通过靶向NFKBIZ抑制巨噬细胞的极化和铁死亡。

• 单位
  广东医科大学; 广东医科大学附属医院